作為制備靶向治療藥物的一種方法，克隆細(xì)胞系的發(fā)展已經(jīng)越來(lái)越受到重視和投入，然而面對(duì)單細(xì)胞克隆日益增長(zhǎng)的實(shí)驗(yàn)需求， 目前常用的實(shí)現(xiàn)方法都不盡如人意。 通過(guò)有限稀釋和顯微鏡操作，或利用像流式細(xì)胞儀這類的自動(dòng)化設(shè)備進(jìn)行細(xì)胞的篩選和分離，數(shù)量少且非常耗費(fèi)時(shí)間和精力，缺少克隆性的依據(jù)，細(xì)胞存活率低，不能有效處理小批量樣本，且具有較高的交叉污染風(fēng)險(xiǎn)。這些設(shè)備的采購(gòu)和運(yùn)營(yíng)成本較高，但卻缺乏證實(shí)克隆來(lái)自單細(xì)胞的證明。

德國(guó)cytena公司開(kāi)發(fā)的單細(xì)胞打印機(jī)（CloneSelect SCP）則有效解決了這一問(wèn)題。這款產(chǎn)品技術(shù)將細(xì)胞檢測(cè)傳感器和按需滴定印刷技術(shù)相結(jié)合。過(guò)程類似于傳統(tǒng)的噴墨打印機(jī)。通過(guò)在細(xì)胞輕輕的沉積在孔板之前篩選出單個(gè)細(xì)胞和細(xì)胞形態(tài)，確保細(xì)胞的活力；使用無(wú)菌的，一次性的打印墨盒避免了交叉污染；在沉積的過(guò)程中，提供單細(xì)胞的圖像，為用戶提供了他們的細(xì)胞系是來(lái)自于單克隆的證據(jù)，符合FDA對(duì)單抗的生產(chǎn)需證實(shí)來(lái)自于單個(gè)細(xì)胞的要求，大大提升藥品的開(kāi)發(fā)進(jìn)程。

Cytena開(kāi)發(fā)的克隆篩選單細(xì)胞打印機(jī)是臺(tái)式的自動(dòng)化的實(shí)驗(yàn)室設(shè)備，由于軟件采用直觀，友好的界面設(shè)計(jì)，所以無(wú)需特別的經(jīng)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)室的任何成員都可以進(jìn)行操作 ，設(shè)備的操作設(shè)置簡(jiǎn)單快速，分離一塊含單細(xì)胞的96孔板只需幾分鐘時(shí)間。

克隆篩選單細(xì)胞打印機(jī)工作原理：

SCP技術(shù)基于頂端的透明微型分配芯片，用于從細(xì)胞懸浮中按需生成微滴。分配器芯片是一個(gè)包含微流體結(jié)構(gòu)的硅玻璃化合物，被稱為劑量室的背面有一個(gè)硅膜（圖b），它被一個(gè)壓電板制動(dòng)器所擠壓偏轉(zhuǎn)，這種擠壓偏轉(zhuǎn)導(dǎo)致腔體內(nèi)的液體位移，液滴從噴嘴噴出來(lái)。根據(jù)流體的物理性質(zhì)和壓電控制參數(shù)，可以使用直徑為40μm的噴嘴，將液滴體積控制在100 pL至250 pL的范圍內(nèi)。

芯片連接到儲(chǔ)存器，可以裝載體積為5至100μL的細(xì)胞懸浮液。通過(guò)簡(jiǎn)單的手動(dòng)上樣法將細(xì)胞懸浮液裝載到容器中來(lái)，芯片通過(guò)毛細(xì)管力自我填充，因此可以在樣品加載后直接打印。

技術(shù)亮點(diǎn)：

單細(xì)胞的證據(jù)可追溯性

在cartridge分離細(xì)胞前后的過(guò)程中，會(huì)連續(xù)拍取多張細(xì)胞圖片，證實(shí)克隆來(lái)自于單個(gè)細(xì)胞。這些圖片會(huì)根據(jù)孔板的位置進(jìn)行命名，并存儲(chǔ)在硬盤中，以便追蹤。

單細(xì)胞打印效率高，且適用于多個(gè)細(xì)胞系

CloneSelect SCP打印效率普遍高于96%,有的細(xì)胞甚至達(dá)到100。分離快速，一個(gè)96孔板只需2-3min，且每個(gè)孔都有多張圖片證實(shí)為單細(xì)胞，該技術(shù)已經(jīng)應(yīng)用于在多種細(xì)胞的單細(xì)胞分離如CHO, HEK,Hela，L929，U2OS等。

細(xì)胞無(wú)損傷，單細(xì)胞存活率高

細(xì)胞無(wú)需標(biāo)記染色，沒(méi)有激光損傷，沒(méi)有電壓的影響，直接采用 catridge進(jìn)行分離，所以細(xì)胞沒(méi)有任何損傷，分離后的細(xì)胞存活率高，克隆恢復(fù)率高。

應(yīng)用領(lǐng)域

• 單克隆篩選

• 單細(xì)胞基因組學(xué)

• 單細(xì)胞PCR

• 稀有細(xì)胞的分離

應(yīng)用案例

克隆細(xì)胞系開(kāi)發(fā)在單抗領(lǐng)域是一個(gè)至關(guān)重要的環(huán)節(jié)?，F(xiàn)有的細(xì)胞系開(kāi)發(fā)流程存在很多弊端如缺乏單克隆證據(jù)，單細(xì)胞分離效率低下，單細(xì)胞存活率低等。

SCP技術(shù)不僅能快速有效的分離單細(xì)胞，還能提供單克隆來(lái)源的證據(jù)，且保證細(xì)胞高的存活率以及0風(fēng)險(xiǎn)的交叉污染。單細(xì)胞打印機(jī)SCP支持96孔和384孔板,已經(jīng)成功應(yīng)用于一系列典型的細(xì)胞系如CHO, U2OS，HEK293, L929，Hela細(xì)胞等。

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